Авторы:
Т. И. Кузьмина
Всероссийский научно-исследовательский институт генетики и разведения животных – филиал Федерального исследовательского центра животноводства – ВИЖ имени академика Л. К. Эрнста, Санкт-Петербург, Россия
E-mail: Этот адрес электронной почты защищён от спам-ботов. У вас должен быть включен JavaScript для просмотра.
Аннотация. Витрификация женских гамет – важнейший инструмент для решения стратегических задач клеточных репродуктивных технологий в животноводстве, ветеринарии, биомедицине: тиражирование элитных особей (клонирование, трансгенез), сохранение биоразнообразия, ксенотрансплантация органов и др. Цель настоящего исследования – оценить показатели ядерно-цитоплазматического созревания (статус хроматина и митохондриальную активность) и компетенции к развитию донорских ооцитов свиней, подвергшихся интра- (ИОВ) или экстраовариальной (ЭОВ) витрификации. Методы. Донорские ооциты свиней (в возрасте 6–8 месяцев) витрифицировали экстра- или интраовариально с использованием криопротекторных агентов (диметилсульфоксид, этиленгликоль, трегалоза, сахароза). Состав криопротекторных агентов дополняли 0,001 % наночастицами ВДК (нВДК), Оттаивали ооциты в растворах трегалозы в ТС-199 с 10 % фетальной бычьей сыворотки ФБС. Ооциты культивировали 44 часа в средах, дополненных клетками гранулезы (106 клетокна 1 мл среды) и/или 0,001 % нВДК при 38.5 °C, в атмосфере 5 % СО2 . Оплодотворение in vitro проводили в соответствии с рекомендациями, представленными нами ранее ⁅17, с. 17⁆. Функциональную активность митохондрий и статус хроматина в ооцитах оценивали методом двойного окрашивания (красители MitoTracker Orange CMTMRos и Hoechst 33258). Результаты. Процент созревших ооцитов при совместном использовании в составе среды для культивирования нВДК и клеток гранулезы составил 61 % при ЭОВ и 29 % при ИОВ, а уровень дробящихся эмбрионов при ЭОВ был на 11 % (31 % против 20 %, Р < 0,05) выше, чем при ИОВ. Максимальные показатели функциональной активности митохондрий среди девитрифицированных ооцитов были отмечены в группе ЭОВ ооцитов, прокультивированных в средах, дополненных нВДК и клетками гранулезы (152 ± 14,9 мкА). Научная новизна. Модернизированы протоколы интра- и экстровариальной витрификации ооцитов свиней, позволяющие значительно увеличить показатели фертильности девитрифицированных гамет путем введения в состав криопротекторных агентов нВДК и кокультивирования девитрифицированных ооцитов в средах с нВДК и клетками гранулезы.
Ключевые слова: ооцит, эмбрион, мейоз, митохондрии, интра- и экстраовариальная витрификация, свинья.
Для цитирования: Кузьмина Т. И. Ядерно-цитоплазматическое созревание ооцитов Sus Scrofa Domesticus в условиях сверхнизких температур // Аграрный вестник Урала. 2023. Т. 23, № 12. С. 83‒93. DOI: 10.32417/1997-4868-2023-23-12-83-93.
